Cómo hacer densitometría con ImageJ

Para hacer densitometría, debe crear un gel, y luego importar sus datos a ImageJ. Puede usar ImageJ para cuantificar geles y blots Western. Primero, necesitas definir qué tipo de densidad quieres calcular. Puede usar números arbitrarios, o puede especificar unidades para la proteína. En cualquier caso, el valor resultante es el área relativa + densidad para cada pico.

Siguiente, necesitas definir los carriles. El primer paso es crear un gel esférico, y luego importar sus datos. Una vez que tenga la imagen, puede iniciar el análisis. Para hacer esto, debe definir los números de carril y un valor gris para cada banda. Luego, debe calcular los valores del área en cada banda. En este paso, debe asegurarse de que cada carril tenga el mismo valor de área.

El segundo paso es definir los tamaños de carril. Primero, seleccione el primer carril. Haga clic en el centro del cuadrado, y arrastre a través del segundo carril. La tercera Slane es la misma que la anterior. Presione CTRL y 2 para configurar la siguiente cresta. El último anillo de números de carril es el mismo. Por último, debe definir el tamaño del carril.

Una vez que haya configurado los valores de píxeles y un valor pico, debe usar la herramienta de selección de Línea recta en ImageJ. Para hacer esto, debes trazar una línea a través de la base del pico. Puede cambiar el tamaño del área y la forma del píxel usando las flechas en la barra de menú. Este paso eliminará el ruido de fondo. Luego, el área de píxeles se mide con la media y el error estándar.

El siguiente paso es crear los valores de los píxeles. Las imágenes digitales se representan en píxeles y píxeles cuadrados. Para medirlos, debe traducir sus valores a unidades del mundo real. Para hacer esto, puede usar ImageJ. Después de seleccionar la imagen, debe hacer clic en el carril correspondiente y hacer clic en “Calibrar” para obtener el valor de píxel. Después de calibrar los valores de los píxeles, debe seleccionar el tamaño de la banda. Una vez que tenga los tamaños de las bandas, los datos se mostrarán como un gráfico.

El siguiente paso es configurar los valores de gris. Normalmente, la imagen tiene bandas de igual oscuridad y claridad. Si las bandas tienen diferentes formas, puede configurar una superposición. El valor gris es el área donde se colocan los píxeles. Si el área del carril es más clara que el valor gris, la región es oscura. Si el tamaño de la banda es mayor que el valor de gris, debe elegir un color más claro para que las bandas se destaquen.